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鼠Streptavidin-HRP試劑盒(帶DAB顯色液)說明書
SPMouseHRPKit(DAB)
鼠Streptavidin-HRP試劑盒(帶DAB顯色液)
Cat.No.K2068
保存:2-8℃
組分說明
Cat.No. K2068 K2068A
KitSize 3ml 18ml
內(nèi)源性過氧化物酶封閉液(試劑1,白色液體) 3ml 18ml
封閉用正常羊血清工作液(試劑2,白色液體) 3ml 18ml
生物素標(biāo)記羊抗鼠二抗工作液(試劑3,黃色液體) 3ml 18ml
HRP標(biāo)記的鏈霉親和素(試劑4,紅色液體) 3ml 18ml
DAB-A液(20×) 250μl 1ml
DAB-B液(1×) 5ml 20ml
*本試劑盒僅適用于一抗為鼠源抗體的IHC實(shí)驗(yàn)
產(chǎn)品簡介
本試劑盒根據(jù)生物素(Biotin)與鏈霉親和素(Streptavidin)具有強(qiáng)親和力的原理設(shè)計(jì)。在鼠源的一抗與相應(yīng)的靶抗原結(jié)合后,本試劑盒中的生物素標(biāo)記羊抗鼠二抗與一抗特異結(jié)合;二抗上標(biāo)記的生物素與標(biāo)記過氧化物酶(HRP)的鏈霉親和素結(jié)合,形成抗原~特異性一抗~生物素化的二抗~HRP標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物。HRP可以催化底物顯色,從而推斷待檢抗原的存在及分布。該試劑盒使用的生物素化二抗、SA-HRP,均采用優(yōu)化的標(biāo)記和純化技術(shù),使得其染色有更高靈敏度和更低的背景,適合于檢測福爾馬林固定石蠟包埋組織切片,以及冰凍切片、細(xì)胞爬片、新鮮制備的血涂片等。鼠Strept-avidin-HRP試劑盒適合與上海研謹(jǐn)生物即用型或濃縮型抗體配套使用。
注意事項(xiàng)
1. 以每張切片加入1滴(約50μl)計(jì)算,3ml可做60張切片,18ml可做360張切片。
2. 對于內(nèi)源性生物素含量比較豐富的組織,使用本試劑盒時最好用內(nèi)源性生物素阻斷劑進(jìn)行封閉。
3. DAB工作液現(xiàn)配現(xiàn)用,配制好的工作液2-8°C避光1小時內(nèi)有效。
實(shí)4.驗(yàn)過程中避免組織片干燥,因此各步孵育時工作液用量必需充足,保證*覆蓋組織樣本,且盡量在濕盒中進(jìn)行孵育。
為5.獲得最佳實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請務(wù)必優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件及試劑用量。
6. DAB為可疑致癌物,使用時請采取必要的防護(hù)措施。
7. 本產(chǎn)品僅用于科研,不能用于人體反應(yīng)或人體治療。
使用方法
1. 常規(guī)處理欲檢測的石蠟或冰凍組織切片或細(xì)胞爬片等樣本。
1)組織切片或細(xì)胞爬片染色前處理:
a.石蠟切片
脫蠟水化:60oC烤片1小時,二甲苯脫蠟二次,每次5分鐘;再依次浸入梯度乙醇(無水乙醇-無水乙醇-95% -85%-75%乙醇)和蒸餾水中各5分鐘水化。
b.冰凍切片和細(xì)胞爬片
切片(或爬片)浸于0.01MpH7.4PBS洗滌3次×5分鐘。然后用0.1%TritonX-100覆蓋組織(或細(xì)胞)浸潤15分鐘,0.01MpH7.4PBS洗滌2次×5分鐘。
2)石蠟切片的抗原修復(fù):絕大大多數(shù)情況下,石蠟組織切片用檸檬酸緩沖液高壓修復(fù)都是適合的。
修復(fù)工作液配制:1L去離子水中加入10ml檸檬酸緩沖液(IHC抗原修復(fù)液,100×)(Cat#:YJ0128),混勻即可。
修復(fù)過程:修復(fù)液加入高壓鍋內(nèi),待修復(fù)切片浸于修復(fù)液中(必需沒過組織),蓋上壓力鍋蓋,加熱至均勻噴汽,從噴汽開始計(jì)時,1~2分鐘后壓力鍋離開熱源,自然冷卻至室溫,取出切片,蒸餾水淋洗后,再用PBS(0.01MpH7.4)漂洗2次,每次3分鐘。
2.滴加適量試劑1(內(nèi)源性過氧化物酶封閉液),室溫孵育10分鐘,PBS充分淋洗。
3.滴加適量試劑2(封閉用正常羊血清工作液),室溫孵育10分鐘,甩干。
4.滴加適量一抗工作液(商品化即用型抗體或適當(dāng)比例稀釋的濃縮抗體),按實(shí)驗(yàn)要求孵育,然后PBS充分淋洗。
5.滴加適量試劑3(生物素標(biāo)記羊抗鼠二抗工作液),室溫孵育10分鐘,PBS充分淋洗。
6.滴加適量試劑4(HRP標(biāo)記的鏈霉親和素),室溫孵育10分鐘,PBS充分淋洗。
7.DAB顯色工作液配制:根據(jù)需要量,將試劑A和試劑B以1:19的體積比混勻后即為DAB顯色工作液。也可選擇每 毫升試劑B中滴加1滴(約50μl)試劑A,混勻即可。
8.顯色:加適量的DAB顯色工作液于需要顯色的組織切片或細(xì)胞爬片上即可顯色,顯色時間一般為1~5分鐘。顯微鏡下觀察控制顯色時間,當(dāng)達(dá)到最佳顯色效果后,自來水沖洗終止顯色。顯色后的切片經(jīng)復(fù)染、脫水透明,封片后可長期保存。
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):
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