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豬瘟病毒抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：豬瘟病毒抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名稱：Classical Swine Fever Virus Antibody Test Kit (ELISA), CSFV Ab

【包裝規(guī)格】

96×2測(cè)試/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒用于定性測(cè)定豬血清中豬瘟IgG抗體。用于評(píng)估豬場(chǎng)豬瘟疫苗免疫狀況，感染豬的血清學(xué)診斷以及豬瘟的流行病學(xué)調(diào)查。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）原理，由包被有高純度的豬瘟重組抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機(jī)理為包被抗原與樣本中的CSFV-IgG結(jié)合，再與酶標(biāo)抗豬IgG抗體形成“包被抗原+CSFV-IgG+酶標(biāo)抗豬IgG抗體”復(fù)合物，加入顯色劑，通過酶催化反應(yīng)顯色。顯色深淺與CSFV-IgG的量成正比，當(dāng)顯色超過設(shè)定的臨界值時(shí)結(jié)果判為陽性，表明免疫有效或有自然感染。

【主要組成成份】

不同批號(hào)的試劑組份不可混用。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

于2℃～8℃避光保存，防止冷凍，有效期6個(gè)月。

【適用儀器】

1．酶標(biāo)儀，單波長(zhǎng)450nm測(cè)量或雙波長(zhǎng)450/630nm測(cè)量。

2．ELISA用洗板機(jī)。

3．微量移液器。

4．水浴箱或恒溫箱。

5．微量振蕩器。

【樣本要求】

1．本試劑檢測(cè)的樣本為豬血清，樣本應(yīng)無菌采集，2℃～8℃貯存不超過一周，長(zhǎng)期應(yīng)在-20℃以下保存。

2．避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長(zhǎng)菌的樣本。

3．樣本中含有常規(guī)用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實(shí)驗(yàn)。

【檢驗(yàn)方法】

1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條。單波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，需設(shè)空白對(duì)照1孔（不加任何液體）；雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，不設(shè)空白對(duì)照孔。設(shè)陰、陽性對(duì)照各2孔，分別加入不稀釋的陰、陽性對(duì)照血清100μl于相應(yīng)孔中。其余為樣本孔，每孔加100μl樣本稀釋液，再分別加入樣本10μl（加入樣本后顏色會(huì)有變化）。

2．溫育：加好樣后振蕩10秒，充分混勻，置37℃溫育30分鐘。

3．洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液（濃縮洗滌液用去離子水以20倍稀釋）注滿反應(yīng)板孔，洗滌5次，每次停留1分鐘，后一次洗后拍干。

4．加酶：每孔加酶標(biāo)記物100μl，注意：空白孔不加酶標(biāo)記物，也不加其他任何液體。

5．溫育：置37℃溫育30分鐘。

6．洗板：同上洗滌。

7．顯色：每孔加顯色劑A、B各50μl，振蕩混勻，37℃避光反應(yīng)15分鐘。

8．終止：每孔加終止液50μl，振蕩10秒，充分混勻。終止后5～30分鐘內(nèi)讀數(shù)。

9．讀數(shù)：單波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，酶標(biāo)儀檢測(cè)波長(zhǎng)為450nm，以空白孔調(diào)零，讀取各孔吸光度值（A值）；雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，以450nm為主波長(zhǎng)、630nm為參比波長(zhǎng)，讀取各孔吸光度值（A值）。注意：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，若酶標(biāo)儀讀數(shù)前沒有以空白孔調(diào)零，則所得的結(jié)果均應(yīng)減去空白孔A值再做計(jì)算和判定。

10．結(jié)果判定：

臨界值（CO.）= 0.15。

樣本A值（S）/臨界值（CO.）≥1，判定為CSFV-IgG陽性； S/CO.＜1，判定為CSFV-IgG陰性。

陰性對(duì)照血清A值應(yīng)小于0.10，陽性對(duì)照血清A值應(yīng)大于0.70，否則試驗(yàn)不成立，需重新試驗(yàn)。注意：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，若酶標(biāo)儀讀數(shù)前沒有以空白孔調(diào)零，則陰陽性對(duì)照血清A值均應(yīng)減去空白孔A值再做判定。

【參考值（參考范圍）】

未感染也未免疫豬瘟疫苗的健康豬群為陰性，S/CO.＜1。仔豬因其體內(nèi)含有有母源抗體，其測(cè)定A值常大于臨界值。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1．嚴(yán)重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球、有沉淀物、長(zhǎng)菌的樣本可能導(dǎo)致假陽性。

2．因個(gè)體差異或免疫時(shí)間長(zhǎng)短等因素可能會(huì)出現(xiàn)個(gè)別豬只免疫疫苗后檢測(cè)結(jié)果為陰性。

3．陽性結(jié)果用于感染豬的血清學(xué)診斷以及流行病學(xué)調(diào)查時(shí)需結(jié)合其他方法和臨床資料進(jìn)行。

【檢驗(yàn)方法的局限性】

CSFV-IgG可作為評(píng)價(jià)豬瘟疫苗免疫效果以及豬瘟病毒感染的血清學(xué)診斷指標(biāo)，但不能區(qū)別二者，若想確認(rèn)是疫苗還是野毒感染產(chǎn)生的抗體需結(jié)合臨床資料、免疫程序及其他診斷方法進(jìn)行。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

1．特異性    以本品檢測(cè)30份陰性參比血清不出假陽性。

2．敏感性    以本品檢測(cè)30份陽性參比血清不出現(xiàn)陰性。

3．精密性    用精密性參比品測(cè)定，CV（%）不高于15%（n=10）。

4．穩(wěn)定性    試劑盒在2℃～8℃放置6個(gè)月或37℃放置3天，檢定結(jié)果達(dá)到以上1-3標(biāo)準(zhǔn)。

【注意事項(xiàng)】

1．本試劑盒僅用于體外診斷。

2．本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對(duì)待，操作時(shí)需戴手套穿工作衣。

3．實(shí)驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

4．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開，未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封4℃保存。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。

5．若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶，屬正?，F(xiàn)象，放置37℃至溶解后即可。

6．應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。

7．加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。

8．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。

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